お客さまレビュー／データ紹介　Ni Sepharose™ 6 Fast Flow

【お客さまレビュー】　1件

コメントをいただいたお客さま	私立O大学　I様	ご感想 従来のものよりも結合量が多い。本当に多い。１度にとれるタンパクが４倍以上に増えました。大満足です。
製品使用時の満足度	★★★★★
使用目的	His-Tagタンパクを素早く簡単に、しかも大量に精製する。

【データ紹介】　3件

• 大阪府立大学大学院　生命環境科学研究科
  山地 亮一 先生
• 国立長寿医療センター　老年病研究部
  松浦 彰 先生

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大阪府立大学大学院　生命環境科学研究科
山地 亮一先生　ご提供データ

Ni Sepharose™ 6 Fast Flowを使用した感想

非常に満足している。他社担体と比べて、価格に大差がなければ購入を検討したい。

実験方法

[サンプル]

名称	(His)6-tagged protein
濃度	3 ml
添加剤	なし
発現系	大腸菌

[精製条件]

結合バッファー	20 mM NaPB, 0.5 M NaCl, 50 mM イミダゾール, 0.5% NP-40, pH 8.0
溶出バッファー	20 mM NaPB, 0.5 M NaCl, 300 mM イミダゾール, 0.5% NP-40, pH 8.0

[操作方法]

オープンカラム

[補足]

Ni Sepharose™ 6 Fast Flowと他社担体それぞれ0.2 mlをカラムにパッキングして比較を行った。

結果

[収量の比較]

担体	収量（mg）
Ni Sepharose™ 6 Fast Flow	0.35
他社担体	0.14

データ

2種類のNi 固定化担体による精製後にSDS-PAGEを行い、精製結果を比較した。

• 1：分子量マーカー
• 2：他社担体
• 3：Ni Sepharose™ 6 Fast Flow
• ←：目的タンパク質

結果についてのコメント

現在使用している他社の担体と比較して、2.5倍量の目的タンパク質が精製・回収できた。精製純度については両者において差は見られなかった。

※お客さまの使用経験に基づく記載です。

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国立長寿医療センター　老年病研究部
室長 松浦 彰先生　ご提供データ

Ni Sepharose™ 6 Fast Flowを使用した感想

非常に使い勝手が良好で、よい製品だと思う

実験方法

[サンプル]

名称	酵母テロメア結合タンパク質
添加剤	1 mM PMSF
発現系	昆虫細胞

[精製条件]

結合バッファー	20 mM リン酸ナトリウム, 500 mM NaCl, 10 mM イミダゾール, pH 7.5
溶出バッファー	20 mM リン酸ナトリウム, 500 mM NaCl, 500 mM イミダゾール, pH 7.5

[サンプル調製の方法]

1. Sf21細胞を75 cm2のフラスコに播種
2. 組換えバキュロウイルス感染後、さらに3日間培養
3. 細胞回収後にlysis buffer [50 mM Tris-HCl （pH 7.5）, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 1 mM PMSF]にて細胞を溶解し、遠心分離によって細胞破砕片を除去した後サンプルとして使用

結果

純度：90%以上
回収率：90%以上

データ

Ni Sepharose™ 6 Fast Flowにより精製後にSDS-PAGE

• 1：分子量マーカー
• 2：細胞破砕液
• 3：素通り画分
• 4-10：溶出画分（1 mlずつ分取）

結果についてのコメント

オープンカラムを使用して、簡便かつ短時間、高純度に目的タンパク質を精製することができた。

※お客さまの使用経験に基づく記載です。