DIGE 道場　第7回
IPGゲルの平衡化から二次元目への添加まで

アガロースゲル溶液の準備

アガロースゲルはまとめて200 ml作成し、15 mlずつ分注して4℃保存しておく。アガロースの組成は下記の通り。

【アガロースゲルの組成】

低融点アガロース　1.0 g、終濃度：0.50％
10×Running Buffer　20 ml　（25 mM Tris, 192 mM Glycine, 0.1％SDS, pH 8.3）
超純水　180 ml
25 mg/ml BPB　200 µl

total：200 ml

使用している試薬とメーカー

試薬	メーカー	コード番号	包装
Agarose Prep	Cytiva	80113007	50 g
Bromophenol Blue （BPB）	Cytiva	17132901	10 g
トリス 999	和光純薬工業	017-16383	5 kg
Glycine	和光純薬工業	073-00737	10 kg
Sodium Dodecylsulfate	和光純薬工業	191-07145	500 g

【溶液調製後の操作】

1. レンジでアガロースが溶けるまで温める
2. 軽く振とうした後、チューブに15 mlずつ入れる
3. 4℃で保存

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アガロースゲルの重層操作

電子レンジで温めておいたアガロースを添加する。Ettan™ DALTやGiant Gel Runner*のように24 ㎝のIPGドライストリップが添加できる横幅のゲルの場合、1 ml程がちょうどよい。ゲルの上面はよく水分を切っておくことが必要である。具体的には平衡化反応の待ち時間を使ってゲル上部の水切りをする。

* 近藤先生のラボで用いているゲル泳動層。バイオクラフト社に特注。

IPGゲルをセットしてからアガロースを入れるという方法もある。ただ、アガロースを先に入れた方が操作しやすい。後述するように乾き気味のIPGゲルがガラス板にへばりつきやすいからである。IPGゲルが短い場合は（11 cmなど）順番はどちらでも構わない。