ウェスタンブロッティングこんなときどうする？
～転写効率をあげたい～

ウェスタン　テクニカル担当者
回答：ウェスタンブロッティング担当

ウェスタンブロッティングのさまざまなポイントの中で改善したいというお声の多かった転写効率について取り上げます。

まず、転写バッファーと泳動バッファーの組成が異なる場合はゲルを転写バッファーに浸してバッファーを置換します。このステップを飛ばすとバンドが消失する、解像度が低下することがあります。

その他、転写効率を上げるポイントは下記の項目に分かれます。

それぞれについて詳しくご説明します。

転写方式の選択

高分子のタンパク質（100～120 kDa以上が目安）は、転写効率が高いタンク式のブロッティング装置をおすすめします。

タンパク質の分子量が小さい（7～10 kDa以下が目安）と0.45 μmのポアサイズのメンブレンを通り抜けてしまいメンブレンに固定されず、検出できないことがあります。

転写バッファー中のメタノールはタンパク質とSDS の結合力を低下させることでメンブレンへの吸着をよくします。一方ゲルが縮んでポアサイズが小さくなり、ゲルからの溶出が低下します。ニトロセルロースでは20％、PVDF メンブレンでは15％を目安に加えます。
転写バッファーに0.01～0.1％のSDS を加えるとゲルからタンパク質の溶出効率が上昇します。