Cytiva

検索のヘルプ

Location：Home ＞ 実験手法別製品・技術情報 ＞ 2D DIGE（蛍光標識二次元発現差異解析）

DIGE道場看板

DIGE 道場　第3回
できるプロのタンパク質抽出術

第3回　もくじ

  1. はじめに　～とってもDIGE（大事）なタンパク質抽出～
  2. タンパク質可溶化液について　
  3. 培養細胞からのタンパク質抽出法
  4. 組織からのタンパク質抽出法
  5. おわりに

Dr. 近藤のコラム
→コラム第3回　「生涯道場編」 ～戦うプロテオーム研究～

レーザーマイクロダイセクション法 プロトコール
3.　2D-DIGE法サンプル調製用の凍結切片の染色

2D-DIGE法用の染色を行う。と言っても通常のHE染色からエオジンで染めるステップを省略すること、固定液、洗浄液、染色液をすべて氷上で冷やしておくこと、この2点が独特なだけである。

2D-DIGE法サンプル調製用の凍結切片の染色

  1. スライドグラスに貼り付けた凍結切片を用意する（上記参照）。
  2. 70％　エタノール、1分
  3. 水洗、10秒
  4. Meyer Hematoxylin（1倍）、2分
  5. 水洗、10秒
  6. PBS、2分
  7. 70％　エタノール、10秒
  8. 95％　エタノール、10秒
  9. 100％　エタノール、10秒
  10. 室温で風乾、10分くらい

図6

図6　2D-DIGE試料調製時の染色用セット一式

大き目の発泡スチロールの箱に氷を満たし、そこに染色液の入ったガラス箱を入れておく。

冷やさないといけないのかと言えば、最初からそのように実験していたので正直よくわからない。

冷やして行いさえすれば確実にできるとだけ言っておこう。

レーザーマイクロダイセクション法による試料調製　詳細プロトコール

  1. 凍結切片の作製
  2. 確認のための凍結切片の染色（HE染色）
  3. 2D-DIGE法サンプル調製用の凍結切片の染色
  4. レーザーマイクロダイセクションによる切片の切断

次へ　レーザーマイクロダイセクションによる切片切断

このページのトップに戻る

DIGE道場トップページへ

お問合せフォーム

※日本ポールの他事業部取扱い製品（例: 食品・飲料、半導体、化学/石油/ガス ）はこちらより各事業部へお問い合わせください。