バイオ実験の原理と方法

タンパク質精製、二次元電気泳動など、バイオ実験の原理と方法をわかりやすくご紹介しています。研究活動にぜひお役立てください。
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• タンパク質精製・クロマトグラフィー
• タンパク質サンプル調製法
• タンパク質イメージング解析
• プロテオミクス
• ゲノミクス
• 細胞／モレキュラーイメージング／その他

タンパク質精製・クロマトグラフィー

• クロマトグラフィーの原理
• 抗体精製のストラテジー
• 3段階精製ストラテジー
  1. 精製の基本戦略と煮物作りの意外な関係
  2. 初期精製ステップ～合い言葉は“質より量とスピード！
  3. 中間精製ステップ～目的分子を追い詰めろ！
  4. 最終精製ステップ～いよいよ千秋楽！
• タンパク質を大きさで分ける (1)
• タンパク質を大きさで分ける (2)
• タンパク質を大きさで分ける (3)
• 組換えタンパク質精製をはじめよう (1)
• 組換えタンパク質精製をはじめよう (2)
• 組換えタンパク質精製をはじめよう (3)
• 複数タグのススメ
  1. His-tag編
  2. GST編
  3. タグは色々
• イオン交換クロマトグラフィーを使いこなそう
  1. イオン交換クロマトグラフィーの基本原理
  2. 分離能に関わる要因
  3. イオン交換担体の成り立ちと性質
  4. 効果的な分離のための操作ポイント(1)
  5. 効果的な分離のための操作ポイント（2）
  6. ～応用編～イオン交換クロマトグラフィーを取り入れた三段階精製
• 抗体精製をマスターしよう
  1. 抗体の成り立ち
  2. 抗体精製の基本スキーム
  3. 抗体精製のストラテジー
  4. 抗体精製のためのサンプル前処理
  5. 抗体精製に用いるカラム・ゲル担体
  6. ポリクローナルIgGの精製プロトコール
  7. モノクローナルIgGの精製プロトコール
  8. モノクローナルIgGの高純度精製
  9. モノクローナルIgMの精製
  10. Yolk sac 抗体IgY の精製
• クロマトグラフィークロニクル - FPLC開発秘史
• クロマトグラフィークイズ
• カラム診断～あなたのカラムは大丈夫？～
  • ゲルろ過カラム
  • イオン交換カラム
  • アフィニティーカラム
• Q&A
  • どの担体を使って免疫沈降を行うの？
  • カップリング担体の選択ポイントは？
  • ゲルろ過クロマトグラフィー担体選択のポイント
  • 製品名から分かるカラムや担体の情報について
    ～製品名についている数字やアルファベットの意味～
• テクニカルチップス
  • Kvick labカセットを用いたCHO細胞培養液の濃縮
  • タンパク質精製のあとは？HiTrap NHS-activated HP Columnsを用いたリガンドカップリング
  • His-tagタンパク質精製の効率アップ！
    ～カラム中でリフォールディングしませんか？～
  • GST融合タンパク質のカラム内消化で精製ステップをショートカット！
  • 勝負はこれから！膜タンパク質の精製
  • 膜タンパク質における複数の界面活性剤による可溶化のスクリーニング
  • 限外ろ過膜を用いた封入体のリフォールディング
  • あなたにもできる！ラボスケールカラムパッキング
  • 絶対に空気を入れない！　カラムの取扱い方法のポイント
  • もしかして乾燥！？　カラムに空気が入ったときの対処法
  • それ、カラムが汚れているサインです。～　あなたは知らぬ間に損をしている！？
  • 手でタンパク質精製しませんか？(第11 回日本蛋白質科学会年会ブース内ミニセミナー報告 )
• ÄKTAの簡単便利機能講座
  • システムポンプの自動流速調整機能（UNICORN4.12以上）
  • 複数のMethodを連続して実行させるには？
  • スカウティング機能 （1）
  • オススメ★ショートカット設定術
  • システム診断（チェックフロー）
  • ～これで安心！　無人カラム平衡化～
  • カラム“全自動洗濯”のススメ
  • 徹底解剖、AKTAdesignサポートサイト！
  • もっと簡単にバッファーpHの検討をしませんか

タンパク質サンプル調製法

はじめに

• イントロダクション

第1章 タンパク質サンプル調製の概要

• 適正なサンプル調製で対処すべき課題
• ワークフローのデザインに関する考慮事項と一般的問題
• 各分析手法の夾雑物許容性と分析能
• Reference

第2章 サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出

• サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出（1）
• サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出（2）
• サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出（3）
• サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出（4）
• サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出（5）
• サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出（6）
• サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出（7）
• サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出（8）
• サンプルの採取、安定化およびタンパク質抽出（9）
• Reference

第3章 目的タンパク質の検出性改善

• 目的タンパク質の検出性改善（1）
• 目的タンパク質の検出性改善（2）
• 目的タンパク質の検出性改善（3）
• 目的タンパク質の検出性改善（4）
• 目的タンパク質の検出性改善（5）
• 目的タンパク質の検出性改善（6）
• 目的タンパク質の検出性改善（7）
• 目的タンパク質の検出性改善（8）
• 目的タンパク質の検出性改善（9）
• Reference

第4章 タンパク質サンプル調製ワークフロー内での適合性の確保

• はじめに、および使用できる方法の概要、清澄化、バッファー交換と脱塩(1)
• バッファー交換と脱塩(2)
• バッファー交換と脱塩(3)
• バッファー交換と脱塩(4)
• サンプルクリーンアップ、サンプル濃縮／容積の低減
• Reference

第5章 サンプルスループットの増加/スクリーニングアプリケーション

• 手法概要/デザインに関する考慮事項と一般的な問題/製品とプロトコール（1）
• 製品とプロトコール（2）
• 製品とプロトコール（3）
• 製品とプロトコール（4）
• Reference

略号と用語、記号解説

タンパク質イメージング解析

• ウェスタンブロッティング関連　ピックアップお問合せ
  1. 非特異バンドが検出される！
  2. シグナルが検出できない！
  3. バックグラウンドが高い！
  4. 定量性を高めるためのポイント
  5. 1枚のメンブレンから2種類の抗体でタンパク質を検出したい
  6. 操作時間をできるだけ短くしたい
  7. 高感度な検出方法に移行する際のポイント
  8. 失敗を未然に防ぐためのTips集
• 失敗を未然に防ぐためのTips
  • 失敗を未然に防ぐための操作ポイント
• ImageQuant LAS 4000シリーズ活用法
  • その1：UV光源について
  • その2：落射青色光源について
  • その3：落射緑色／落射赤色光源について
• CCDイメージャー／検出に関する技術情報
  • イメージャーImageQuant LAS 4000シリーズでの高感度ウェスタンブロッティング　（LAS-1000との検出感度比較）
  • 高感度なウェスタンブロッティング検出のための工夫　CCDイメージャーのビニング機能について
  • より定量的なケミルミネッセンス(化学発光)・ウェスタンブロッティングを実現するために　～適切な露光時間の設定～
• お役立ち製品情報
  • 免疫沈降用スピンカラム
    ～目的タンパク質を効率的に濃縮・回収～
  • Cytiva タンパク質分子量マーカー大全

プロテオミクス

• 二次元電気泳動用のサンプル調製法
• カタボライトリプレッションを用いた発現調節
• 塩基性タンパク質の二次元電気泳動パターンの再現性向上
• 二次元電気泳動ゲル上のスポットのpIを推定するには？
• 基本的なサンプル調製テクニック
• 二種類の蛍光標識法を極める （前編：それぞれの長所を知る）
• 二種類の蛍光標識法を極める（後編：タンパク質同定までの流れ）
• 2D-DIGE法によるアイソフォームタンパク質の量変動解析
• DIGE定期便
  1. 基本的なサンプル調製テクニック
  2. 二種類の蛍光標識法を極める 前編
     「2つの標識法の特徴と違い」
  3. 二種類の蛍光標識法を極める 後編
     「DIGE解析からタンパク質スポット同定への手順」
  4. アイソフォームタンパク質の量変動解析
  5. 細胞膜表面タンパク質の選択標識によるディファレンシャル解析
• 1歩進もう　ステップアップテクニック
  • 蛍光ウェスタンでの多重検出アプリケーション
  • ECL Plexと二次元ウェスタンブロッティングの組合せアプリケーション
  • HyperPAGE
    蛍光標識SDS-PAGEによるディファレンシャル解析手法
  • タンパク質の品質管理におけるHyperPAGE利用の可能性
  • タグ付きタンパク質を用いたタンパク質間相互作用解析
  • 全タンパク質の検出画像とイムノブロッティング画像の重ね合わせによる抗体反応性タンパク質の同定

ゲノミクス

• DNA精製カラム
• DNAシークエンシング用鋳型調製試薬
• mRNAの精製方法
• ゲノムDNAの増幅
• ゲノムDNAの増幅 2